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    ELISA法測定肺炎衣原體實驗步驟

    發(fā)布時間: 2014/10/21  點擊次數(shù): 795次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    ELISA試劑盒實驗中所需要用到的試劑:

    1、濃縮酶聯(lián)物; 5、弱陽性對照;
    2、標本稀釋液; 6、預包被微孔板;
    3、終止液; 7、底物A、B;
    4、陽性對照; 8、陰性對照。

    ELISA試劑盒實驗檢驗過程:
    1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中,長期可存于2—8℃環(huán)境中。
    2、配制酶聯(lián)物 按1:101倍稀釋,即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測標本數(shù)量確定稀釋量),未用完的丟棄。
    3、待試劑盒平衡至室溫后,待測標本按1;51稀釋,即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。
    4、將稀釋標本置37℃環(huán)境中20min。
    5、各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中,空白對照孔加100u1標本稀釋液,蓋好反應板,置37℃環(huán)境中30min。
    6、甩盡板中液體,每孔用200~300ul洗滌液洗5次,每次均需拍干。
    7、每孔加酶聯(lián)物100~1,蓋好反應板,置37℃環(huán)境中30min。
    8、甩盡板中液體,洗5次,每次拍干。
    9、加底物A、B各1滴或各50tzl,混勻,置37℃環(huán)境中15min。
    10、取出,加終止液1滴,用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液,直接判斷結果。
    實驗過后,我們要做一個結果判斷:
    1、陰性對照平均OD值須小于0.20。
    2、弱陽性對照平均OD值須在0.20—0.65。
    3、弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時,本試驗結果可信,否則重復實驗。
    4、若待測標本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性,反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10%范圍內(nèi)再測1次,如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。

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